DEVELOPMENT OF HPLC METHOD FOR ANALYSIS OF TRADITIONAL MEDICINES CONTAINING CISSUS QUANDRANGULARIS

Abstract

The development of HPLC method for the analysis of traditional medicines containing Cissus quadrangularis aimed to develop a method for the analysis of flavonoids in the traditional medicines using the HPLC technique and to analyze and compared the markers such as quercitrin and quercetin in the different formulas. The herbs were purchased from different five herb stores by extracting the herbs with 95% ethanol and using sonicating extraction, compared the chromatographic fingerprint of each herbs and analyzing the contents with the HPLC technique. The method validation was based on the criteria of the ICH guidelines. The standard quercitrin concentration 4.8 – 9.6 µg/mL and quercetin concentration 4.08 - 8.16 µg/mL were used. The results of the study were as follows: the method was accurate, precise and suitable for analyzing the traditional medicines. The chromatographic fingerprint of the same herbs were the same pattern and the flavonoid content between the two formulas were not different.การพัฒนาวิธีวิเคราะห์ตำรับยาผสมเพชรสังฆาตด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงเป็นการศึกษาการพัฒนาวิธีวิเคราะห์หาปริมาณสารสำคัญกลุ่ม flavonoids ในยาผสมเพชรสังฆาตโดยเทคนิค HPLC และวิเคราะห์หาปริมาณสารเทียบ ได้แก่ quercitrin และ quercetin เพื่อเปรียบเทียบปริมาณสารในสูตรตำรับที่ต่างกัน ทำการซื้อสมุนไพรต่าง ๆ ของสูตรตำรับจากแหล่งร้านขายสมุนไพรจำนวน 5 ร้าน สกัดสารด้วยตัวทำละลาย 95%ethanol โดยเทคนิคการใช้คลื่นความถี่สูง ตรวจสอบ chromatographic fingerprints ของสมุนไพรแต่ละชนิดและวิเคราะห์ปริมาณสาร การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ตามหลักของ ICH guidelines พบว่า การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ด้วยสารมาตรฐาน quercitrin สมการเส้นตรง y = 10370x + 581.04 ค่า R2 = 0.9996 ความแม่นยำมีค่า recovery อยู่ในช่วง 99.95 – 102.76% ค่า LOD และค่า LOQ มีค่าเท่ากับ 0.05 และ 0.15 µg/mL ตามลำดับ ส่วนสาร quercetin สมการเส้นตรง y = 13343x - 1789.3 ค่า R2 = 1 ความแม่นยำมีค่า recovery อยู่ในช่วง 100.77 – 101.63% ค่า LOD และค่า LOQ มีค่าเท่ากับ 0.06 และ 0.17 µg/mL ตามลำดับ ความถูกต้องของวิธีของสารทั้ง 2 ชนิดมีค่า %RSD น้อยกว่า 2% ถือว่าวิธีวิเคราะห์มีความถูกต้อง แม่นยำ มีความเหมาะสมตามเกณฑ์ของ USP37 สามารถนำมาใช้ในงานวิเคราะห์หาปริมาณสารทั้ง 2 ชนิดได้ ส่วน Chromatographic fingerprints ของสมุนไพรชนิดเดียวกัน แต่มาจากร้านขายสมุนไพรที่ต่างกัน มีลักษณะคล้ายกัน ส่วนปริมาณสารกลุ่ม flavonoids ในตำรับยาทั้ง 2 สูตร มีปริมาณไม่แตกต่างกัน